血清蛋白電泳操作步驟及注意
更新時間:2014-04-21 點擊次數:4933次
在堿性環境里,血清蛋白皆帶陰電荷,在電場中向陽極泳動,因各蛋白質等電點和分子量有差異,分子量小、陰電荷多泳動zui快;分子量大、陰電荷較少者泳動較慢。電泳后,從陽極開始,依次為白蛋白、a1球蛋白、a2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白五個區帶。
血清蛋白電泳操作步驟
㈠ 開機,啟動電泳儀。
㈡ 將1個(用于7 PROTEIN或用于15 RPOTEIN)或2個(用于30 PROTEIN)加樣梳置于平板上,有數字的一端向上,在2分鐘內完成每塊加樣梳的加樣,每孔加10ul樣品,然后齒梳向上把加樣梳放于濕盒內5分鐘。
㈢ 選擇相應的電泳程序,使用HYDRAGEL 7 PROTEIN(E)時選擇儀器的“PROTEIN 7”電泳程序,使用HYDRAGEL 15/30 PROTEIN(E)時選擇儀器的“PROTEIN 15/30”程序。 ㈣ 從包裝袋內取出緩沖條,將其固定在電極支架背側的釘上,再取出凝膠,用薄濾紙快速輕輕地吸去凝膠表面多余的液體,在溫控板表面下1/3處加120 ?l[HYDRAGEL 7 PROTEIN(E)]或200ul[HYDRAGEL 15 PROTEIN(E)]蒸餾水或去離子水,將凝膠片底邊緊靠框架底邊,邊緣對齊邊線,略彎曲凝膠片慢慢放平,注意凝膠片下面勿出現氣泡。
㈤ 自然放下支架,從濕盒中取出加樣梳并去除齒梳下的保護支架,7和15個樣品分析的加樣梳置于支架6號位,30個樣品分析的加樣梳則分別置于3號和9號位,注意點樣梳上的數字必須面對操作者,關上電泳艙蓋,按下鍵盤左側的綠色箭頭“START”鍵,電泳開始,確保儀器右側的空氣通道不被堵塞。
㈥ 電泳儀自動發出蜂鳴聲,提示電泳結束,打開電泳蓋,將加樣梳和緩沖條丟棄,取出已烘干的膠片,用濕紙巾擦拭電極和溫控板,將膠片固定于凝膠支架上放入染色空間中,在檢查染色液瓶內是否有300ml染色液,脫色液瓶內是否有1000ml脫色液以及是否排空了廢液瓶后,選擇“PROT./B1-B2/Hb”染色程序并按“start”鍵開始染色。
㈦ 在染色、脫色以及干燥步驟完成后,電泳儀自動發出蜂鳴聲,取出凝膠支架,將烘干的膠片用光密度儀進行掃描,若希望膠片背景更加清晰,在進行掃描前可以額外增加一個沖洗步驟,程序為“WASH ISOENZ/GEL”。 ㈧ 關機,在電腦系統上對掃描結果進行分析。
血清蛋白電泳操作注意事項
㈠為達到*檢測效果,同一試劑盒內的所有組分必須一并使用。
㈡氨基黑染液的配制必須按照試劑盒內使用說明配置,否則會降低蛋白片段的檢測效果。
㈢用薄濾紙吸去凝膠表面多余液體時,接觸時間不能太長,應快速移去,以免凝膠脫水。
㈣注意先掛緩沖條再放凝膠片,緩沖條取出時應均勻擠捏使緩沖液能分布均勻。