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羅氏蛋白酶K的廣泛應用及保存
更新時間:2015-08-26   點擊次數:2674次
   羅氏蛋白酶K是一種用途廣泛的非特異性的絲氨酸蛋白酶。在pH 4到pH 12的條件下均有活性,在SDS、尿素或EDTA存在時亦很穩定。羅氏蛋白酶K常用于提取mRNA、基因組DNA,或用于從各種細胞中提純DNA和RNA時消化雜蛋白。還可用于糖蛋白的修飾,以及蛋白質結構研究等方面。

  羅氏蛋白酶K的應用比較廣泛,它可以消化包圍靶DNA蛋白,因此使用羅氏蛋白酶K能夠增加探針與靶核酸結合的機會增強雜交信號,但在使用羅氏蛋白酶K時要注意使用的濃度,過高或者過低都會破壞細胞的結構、核消失等影響試驗結果。

  羅氏蛋白酶K的作用:

  蛋白酶K在原位雜交技術中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質的作用,以增加探針與靶核酸結合的機會,提高雜交信號。但蛋白酶K的濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時,都會對細胞的結構有一定的破壞,導致組織切片的脫落,細胞核的消失,從而影響雜交結果。EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用,解決上述出現的問題,并能達到理想的染色效果。

  羅氏蛋白酶K的配制和保存

  推薦反應緩沖液:50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2。

  蛋白酶k配制標準:20mg/ml蛋白酶K配制標準(proteinase K):將200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中,輕輕搖動,直至蛋白酶K*溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。

  羅氏蛋白酶K的保存:保存在-20℃冰箱里,避免反復凍融,有效保證12月。孵育溫度為55至65℃,理想孵育溫度為58℃,孵育時間為15分鐘至48小時;理想孵育時間為2小時。

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