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QIAGEN試劑盒試驗過程關鍵性的四步驟
更新時間:2015-12-14 點擊次數:1929次
QIAGEN試劑盒操作過程看似簡單,但稍不注意都會影響到試驗效果,QIAGEN試劑盒在試驗過程中,關鍵的步驟有哪些呢?小編為您揭曉。
一、重要的洗滌
不充分的洗滌會導致差異和高背景,從而帶來不理想的實驗結果。如果未結合的材料殘留在微孔板中,那么它會增加背景噪音。有必要的話,可增加洗滌液中的鹽濃度,這會阻止非特異結合反應。如果背景過高,懷疑洗滌不夠時,可以嘗試增加洗滌次數。
二、QIAGEN試劑盒檢測試劑要適量
切勿使用過多的QIAGEN試劑盒。如果濃度過高,或者未正確稀釋,則會導致高背景。也不要顯色過度,如有必要,優化一下何時應加入終止液。
三、抗體濃度須優化
如果試劑稍有不同,則可能需要優化抗體的量。非特異的抗體結合會增加背景。為了防止這一點,切勿使用過多的一抗或二抗。
四、關鍵的封閉
封閉液的作用是讓不相關的蛋白占據微孔板中潛在的結合位點。這就降低了可產生信號的抗體非特異結合的機會。如果背景過高,懷疑封閉不充分,那么可以嘗試使用更高濃度的封閉液,或適當延長封閉時間。
目前主要有兩種類型的封閉液:蛋白和非離子型去污劑。使用的類型須取決于多個因素,包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、抗體和檢測試劑。好的封閉液應降低非特異性結合,但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發生相互作用。
保證以上四個步驟不出錯,可以讓QIAGEN試劑盒發揮的作用。