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BCA蛋白濃度測定試劑盒使用說明
更新時間:2016-03-23   點擊次數:5793次

BCA蛋白濃度測定試劑盒使用說明

試劑盒組成

包裝(500微孔)

保存

BCA試劑

100ml

2-8

Cu試劑

3ml

2-8

PBS稀釋液

30ml

2-8

BSA蛋白標準 (5mg/ml BSA)

1ml

 -20

本試劑盒自訂購之日起一年內有效。本試劑盒用于酶標板或者200ul比色皿時可做500孔。當使用2ml比色皿時可做50孔,如果是1ml比色皿時可做100孔。

產品簡介

堿性條件下,蛋白將Cu2+還原為Cu+ Cu+BCA試劑形成紫顏色的絡合物,測定其在562nm處的吸收值,并與標準曲線對比,即可計算待測蛋白的濃度。常用濃度的去垢劑SDS,Triton X-100Tween不影響檢測結果,但受螯合劑(EDTA,EGTA)、還原劑(DTT,巰基乙醇)和脂類的影響。實驗中,若發現樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高,可試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

使用說明

一,微孔酶標儀法

1.         配制工作液根據標準品和樣品數量,按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑(50:1)配制成BCA工作液,充分混勻(混合時可能會有渾濁,但混勻后就會消失)。BCA工作液室溫24小時內穩定。

2.         稀釋標準品:取10微升BSA標準品用PBS稀釋至100微升(樣品一般可用PBS稀釋),使終濃度為0.5mg/ml。將標準品按0, 2, 4,68, 12, 16, 20微升加到96孔板的蛋白標準品孔中,加PBS補足到20微升。

3.         將樣品作適當稀釋(多做幾個梯度,如作2倍、4倍、8倍稀釋),加20微升到96孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時的誤差,標準線前面的點可能不很準確,所以盡可能的讓樣品點落在標準線1/2后。

4.         各孔加入200微升BCA工作液,37放置15-30分鐘。用酶標儀測定A562nm,根據標準曲線計算出蛋白濃度。使用溫箱孵育時,應注意防止因水分蒸發影響檢測結果。

 二,分光光度計法

如沒有酶標儀,可用分光光度計在離心管中混勻后加入比色皿中比色。

步驟如下:

1.配制工作液根據標準品和樣品數量,按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑(50:1)配制成BCA工作液,充分混勻(混合時可能會有渾濁,但混勻后就會消失)BCA工作液室溫24小時內穩定。

2,  稀釋標準品:取100微升BSA標準品用PBS稀釋至1ml(樣品一般可用PBS稀釋),使終濃度為0.5mg/ml。

3,  取八支(或者更多)5ml離心管,標讓號,按下表加入試劑。

離心管號

1

2

3

4

5

6

7(樣品管1

8(樣品管2

9(樣品管3

標準蛋白BSA

0

40ul

80ul

120ul

160ul

200ul

200ul適當稀釋的樣品1

樣品2

……

PBS

200ul

160ul

120ul

80ul

40ul

0

0

0

0

BCA工作液

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

 

4  37放置15-30分鐘。用分光光度計測562nm處吸光值,根據標準曲線計算出蛋白濃度。

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