Percoll和淋巴細胞分離液(淋分)都是利用細胞密度不同來分離細胞的,但是percoll區分的密度梯度更多,就是如果幾種細胞密度相差不多時,percoll依然能分開,可是普通的淋分就無能為力了,也可以認為,percoll分離的細胞純度更高,
Ficoll與Percoll均為密度梯度離心法
?、貴icoll-Hypaque密度梯度離心法:人外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)包括淋巴細胞和單核細胞,其體積、形狀和比重與其他細胞不同,紅細胞和多核白細胞比重較大,為1.092左右,而淋巴細胞和單個核細胞比重為1.075左右。利用密度在1.077±0.001g/L之間近于等滲的Ficoll-Hypaque混合溶液(稱為淋巴細胞分層液)作密度梯度離心時,各種血液成分將按密度梯度重新分布聚集。血漿和血小板由于密度較低,故懸浮于分層液的上部;紅細胞與粒細胞由于密度較大,故沉于分層液的底部;PBMC密度稍低于分層液,故位于分層液界面上,這樣就可獲得PBMC。
?、赑ercoll密度梯度離心法:Percoll是Pharmacia公司的商品名,成分為硅化聚乙烯吡咯烷酮(PVP),為無毒,無刺激的新型密度梯度離心分離劑。聚乙烯吡咯酮包被的硅膠混懸液,它具有易成等滲、粘度低、無毒性、不引起細胞聚集等優點,已得到廣泛引用。由于Percoll在培養基中顆粒大小不等,其在離心過程中自然形成密度梯度,從而將不同密度的細胞分離出來。將1份10×PBS與9份percoll儲存液混合,制成等滲Percoll懸液,此懸液被認為是100 % Percoll懸液,其密度為1.1294g/ml,可通過用PBS(1x)或組織培養液稀釋此100%Percoll而獲得適宜密度進行細胞分離,因為稀釋度與密度線性相關
一句話總結:Ficoll只能分離出密度在1.077±0.001g/L之間的淋巴細胞,PERCOLL能將全血中的多種細胞分離出來,若只分離淋巴細胞,可以用普通淋巴細胞分離液