對(duì)于胎牛血清的使用及保存還不知道的就趕緊看看本篇吧
更新時(shí)間:2022-11-11 點(diǎn)擊次數(shù):1913次
胎牛血清在科研市場(chǎng)上應(yīng)用廣泛相信大家都知道。但對(duì)于胎牛血清的使用及保存,并不是所有人都那么清楚,今天小編就以胎牛血清的儲(chǔ)存、常見(jiàn)問(wèn)題及處理方法進(jìn)行分析,建議收藏!
1.如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
未拆封的血清,一般情況下應(yīng)存放于-10℃至-20℃,在產(chǎn)品規(guī)定的效期內(nèi)均可使用,若一次無(wú)法用完一瓶,建議無(wú)菌分裝血清至合適大小的無(wú)菌離心管內(nèi),再放回冷凍。
將血清從冷凍冰箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融,或通過(guò)水浴鍋促使其溶解。但必須注意的是,融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。溶解后建議盡快使用,若長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃,血清中的各種(脂)蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能因凝集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。
總而言之:血清推薦在-10至-20℃條件儲(chǔ)存,并避免反復(fù)凍融。
2.血清中絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?
1.將冷凍保存的血清取出后,置4℃冰箱靜止過(guò)夜;
2.待血清融化后,上下顛倒,輕輕混勻,繼續(xù)4℃2-3小時(shí);
3.輕輕吸取上層血清,分裝,余底下50ml左右;
4.低速離心5分鐘,去掉沉淀。
若解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該怎么處理?
胎牛血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但普遍的原因是由于胎牛血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在胎牛血清解凍后,也會(huì)存在于胎牛血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響胎牛血清本身的質(zhì)量。
若欲去除這些絮狀沉淀物,可以將胎牛血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾。我們不建議您以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞您的過(guò)濾膜。
解凍胎牛血清時(shí),請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若胎牛血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。解凍胎牛血清時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
請(qǐng)勿將胎牛血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,胎牛血清會(huì)變得混濁,同時(shí)胎牛血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害,而影響胎牛血清的質(zhì)量。胎牛血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無(wú)須做此步驟。若必須做胎牛血清的熱滅活,請(qǐng)遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。
3.如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?
1.解凍時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一;
2.分裝凍存時(shí),須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡);
3.切勿由-20℃直接至37℃水浴鍋解凍,較大的溫差,易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀;
4.切勿將血清置于37℃過(guò)長(zhǎng)時(shí)間,否則可能使之渾濁,其中一些不穩(wěn)定的組分也會(huì)因此受到影響,最終降低血清的品質(zhì);
5.血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無(wú)須做此步驟;
6.若必須做血清的熱滅活,請(qǐng)遵守56℃,30分鐘的原則,并且保持搖晃均勻。溫度過(guò)高、時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多。
4.血清中的“黑膠蟲(chóng)”是怎么回事?
在細(xì)胞培養(yǎng)的時(shí)候,有時(shí)會(huì)在400倍顯微鏡下看到小黑點(diǎn)在動(dòng),小黑點(diǎn)有時(shí)呈點(diǎn)狀,有時(shí)呈小的片狀,運(yùn)動(dòng)形式為在原地振動(dòng),類(lèi)似布朗運(yùn)動(dòng),這種小黑點(diǎn)既不是細(xì)菌、霉菌,也不是支原體,目前業(yè)內(nèi)人士稱(chēng)其為“黑膠蟲(chóng)”。
黑膠蟲(chóng)究竟是一種生物還是非生物,本身就存在爭(zhēng)議。黑膠蟲(chóng)一般是存在血清里的,而血清通常是經(jīng)過(guò)0.1μm濾膜過(guò)濾的,所以血清里不可能存在細(xì)菌、霉菌及支原體等微生物。如果說(shuō)黑膠蟲(chóng)不是生物,它會(huì)不斷增多,達(dá)到一定數(shù)量時(shí)會(huì)與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng),與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng),從而使得細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不足而死亡。