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FITC標(biāo)記套裝

  • 型   號(hào):
  • 價(jià)   格:
  • 更新時(shí)間:2024-08-24
  • 廠家性質(zhì):經(jīng)銷商

本套裝是將FITC標(biāo)記的常用試劑集合為一體而成。適合于蛋白等含有氨基物質(zhì)的標(biāo)記。特別是抗體的標(biāo)記。
如果待標(biāo)記物分子量太小(如小于5KD),可能并不適合用此套裝(主要是后期純化去除未標(biāo)記上的FITC,可選用透析袋)。

 

FITC標(biāo)記套裝
P1150   FITC標(biāo)記套裝 NobleRyder 一套 640
FITC標(biāo)記套裝
組成
規(guī)格
保存條件
FITC
10mg
-20
DMSO
10ml
RT
0.2M PH9.5 CB
100ml
2-8
1M NH4Cl
1ml
2-8
Sephadex G-25
100ml(約50%含量)
2-8
層析空柱(10ml)
一套
RT
透析袋MD25(8000-14000)
20CM
2-8
鐵夾(夾透析袋)
兩支
RT
保存條件:FITC -20度保存,其他常溫保存。
產(chǎn)品說明:本套裝是將FITC標(biāo)記的常用試劑集合為一體而成。適合于蛋白等含有氨基物質(zhì)的標(biāo)記。特別是抗體的標(biāo)記。
如果待標(biāo)記物分子量太小(如小于5KD),可能并不適合用此套裝(主要是后期純化去除未標(biāo)記上的FITC,可選用透析袋)。
標(biāo)記原理:在高PHFITC可蛋白等分子的氨基相連,形成共價(jià)健。
操作方法:
一,標(biāo)記量的計(jì)算:FITC分子量為389.4。一般為FITC:待標(biāo)記物=101左右。比如抗體IgG分子量一般為150160KD。則1mg HRP可標(biāo)記抗體40mg之間。
二,計(jì)算好各步反應(yīng)時(shí)間。作好開始標(biāo)記的準(zhǔn)備工作。因?yàn)闃?biāo)記是在PH9.5的條件下反應(yīng),如果待標(biāo)記物本身鹽含量很低并且緩沖力差,如生理鹽水,可等二天再準(zhǔn)備。如果不確定,將0.2M PH9.5 CB稀釋20倍,作為透析液,將待標(biāo)記物裝入透析袋中4℃透析過夜,透析袋適當(dāng)留長(zhǎng)約1ml體積的量以備第二天加入酶(透析袋用雙蒸水清洗三次,祥細(xì)使用請(qǐng)見附錄)。
三,如果樣品緩沖能力很小(固體可用水溶解),加入1/20體積的0.2M PH9.5 CB,混勻。
四,準(zhǔn)備層析柱(使用方法見附錄)。
五,在樣品準(zhǔn)備好的情況下,稱量2mg左右FITC(請(qǐng)不要一次稱量過小,稱量過小時(shí),誤差會(huì)很大),加入1ml DMSO溶解。取適量溶解好的FITC,加入準(zhǔn)備好的樣品迅速混勻。避光常溫反應(yīng)兩小時(shí)或者4℃反應(yīng)過夜。
六,過柱。請(qǐng)保證總?cè)芤后w積不超過總體積的1/5。比較理想的是在1/10。也就是10ml凝膠,zui多過柱1ml的標(biāo)記液(此步也可以改為透析。一般避光透析兩天左右,到?jīng)]有明顯黃色出來為止)。   
七, 加入1/20體積的1M NH4Cl,避光4℃反應(yīng)兩小時(shí)
 
附透析袋使用方法:
本透析袋已預(yù)處理過,用雙蒸水清洗后將水用適當(dāng)吸一下。就可直接使用。透析袋上下都可以用鐵夾,但如果鐵夾不夠用,下部可用細(xì)線或者其他的透析袋夾。
將透析袋輕輕的折上兩到三折。用線或者透析袋夾封住,上面支開,加入待透析物,留一定量的空氣在頂上,并小心的折一折,用鐵夾夾住,輕輕的擠壓,如沒發(fā)現(xiàn)有液體流出,可放入透析液中。一般透析可用純凈水瓶去頂使用。用一次性筷子或者其他合適物穿過鐵夾,將透析袋吊在透析液中,補(bǔ)充透析液,使透析液蓋過透析袋中的液面而不要淹過鐵夾下面。
分子篩柱使用方法:
取空柱,加入雙蒸水沖洗三次,找一合適的地方架好,下面收集廢液,將Sephadex G-25取出搖勻,輕輕的沿壁倒入柱中(用去尖移液器加入也可以),等液體流出少量時(shí),不停的補(bǔ)加凝膠到一合適的體積。一般加到10ml左右。在上口留出1-2ml空間。灌完膠后,用三倍體積的雙蒸水沖洗(從上面加入,下面自動(dòng)流出),再用合適的緩沖液沖洗三倍體積(如生理鹽水或者PBS等)。
當(dāng)zui后一次加緩沖液后,把柱上層弄平整。等上層溶液*流完,就可以加入待過柱的標(biāo)記液。用去尖吸頭小心的中空滴加,如果一次加不完,等流出少量后再加,一直加完。待標(biāo)記物*流干后,再加入少量約3-5滴緩沖液(如生理鹽水或者PBS等),流完再加,如此三次左右,接著就可以一次加入1-2ml緩沖液(如生理鹽水或者PBS等)。加到一定體積后,可以看到柱中黃色會(huì)分層。收集下層溶液,加入適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑等,定溶。備用。
用過的凝膠可以丟棄或者重復(fù)使用(如果重復(fù)使用,須用大量的緩沖液沖洗,待上層黃色*流走。折中的方法是小心的將上層黃色膠挖掉。流下層的回收)

P0910
0.01M PBS(干粉) PH7.2-7.4
NobleRyder
2L
8.00
P0930
0.1%胰蛋白酶液消化液
NobleRyder
10ml
120.00
A0970
10×多聚賴氨酸溶液(免疫組化)
NobleRyder
10ml
260.00
A0980
4%多聚甲醛
NobleRyder
100/500ml
60.00/200.00
A0940
AEC顯色試劑盒(20×)
NobleRyder
1ml/10ml
100.00/400.00
A0960
BCIP/NBT顯色試劑盒
NobleRyder
100ml
380.00
A0950
DAB顯色試劑盒(20×)
NobleRyder
3ml
100.00
P1150
FITC標(biāo)記套裝
NobleRyder
一套
640
P0010
Mayer';蘇木素染液
NobleRyder
10ml/100ml/500ml
60.00/240.00/680.00
P1140
抗體稀釋液(一抗稀釋液)
NobleRyder
10ml/100ml
40/280
A0990
抗熒光衰減封片劑
NobleRyder
5ml/25ml
70.00/240
P1100
辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記套裝
NobleRyder
一套
560
P0020
檸檬酸鈉緩沖液0.01mol/L,pH6.0,
NobleRyder
1L
8.00

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