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細(xì)胞凍存液

  • 型   號:
  • 價   格:
  • 更新時間:2024-08-24
  • 廠家性質(zhì):經(jīng)銷商

細(xì)胞凍存液
C0050 NobleRyder 100ml 360.00
此主要是由血清和DMSO組成,適合于大多數(shù)細(xì)胞的凍存,其凍存方法與常規(guī)方法相同。

細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇

一、細(xì)胞凍存液原理

在不加任何條件下直接凍存細(xì)胞時,細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會形成冰晶,能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機(jī)械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等,能引起細(xì)胞死亡。如向培養(yǎng)液加入保護(hù)劑,可使冰點(diǎn)降低。在緩慢的凍結(jié)條件下,能使細(xì)胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細(xì)胞。貯存在-130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。

細(xì)胞復(fù)蘇時速度要快,使之迅速通過細(xì)胞zui易受損的-5~0℃,細(xì)胞仍能生長,活力受損不大。

目前常用的保護(hù)劑為二甲亞砜(DMSO)和甘油,它們對細(xì)胞無毒性,分子量小,溶解度大,易穿透細(xì)胞。

二、細(xì)胞凍存液操作步驟

(一)凍存
1、消化細(xì)胞(同實(shí)驗(yàn)二),將細(xì)胞懸液收集至離心管中。
2、1000rpm離心10分鐘,棄上清液。
3、沉淀加,輕輕吹打均勻,計數(shù),調(diào)整至5×106/ml左右。
4、將懸液分至凍存管中,每管1 ml。
5、將凍存管口封嚴(yán)。如用安瓿瓶則火焰封口,封口一定要嚴(yán),否則復(fù)蘇時易出現(xiàn)爆裂。
6、貼上標(biāo)簽,寫明細(xì)胞種類,凍存日期。凍存管外拴一金屬重物和一細(xì)繩。
7、按下列順序降溫:室溫→4℃(20分鐘〕→冰箱冷凍室(30分鐘)→低溫冰箱(-30℃ 1小時)→氣態(tài)氮(30分鐘)→液氮。
注意:操作時應(yīng)小心,以免液氮凍傷。液氮定期檢查,隨時補(bǔ)充,不能揮發(fā)干凈,一般30立升的液氮能用1~1.5月。

(二)復(fù)蘇
1、準(zhǔn)備一個茶缸或1000ml的燒壞,內(nèi)裝2/3杯37℃的溫水。
2、從液氮中取出凍存管、迅速置于溫水中并不斷攪動。使凍存管中的凍存物在1分鐘之內(nèi)融化。
3、打開凍存管,將細(xì)胞懸液吸到離心管中。
4、1000rpm離心10分鐘,棄去上清液。
5、沉淀加10ml培養(yǎng)液,吹打均勻,再離心10分鐘,棄上清液。
6、加適當(dāng)培養(yǎng)基后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中,37℃培養(yǎng),第二天觀察生長情況。

三、試劑和器材
器材:液氮罐、凍存管(塑料螺口凍存管或安瓿瓶)、離心管、吸管、離心機(jī)等
試劑:0.25%胰酶、培養(yǎng)基、含保護(hù)劑的培養(yǎng)基(即凍存液)

C0050 NobleRyder 100ml 360.00

此主要是由血清和DMSO組成,適合于大多數(shù)細(xì)胞的凍存,其凍存方法與常規(guī)方法相同。

C0170

10×PBS,PH7.2-7.4,10倍濃縮液,液體

NobleRyder

500ml

100.00

C0260

1M Hepes溶液(細(xì)胞培養(yǎng))

NobleRyder

125ml

236.00

C0140

D-Hanks(HBSS)不含鈣鎂,不含酚紅

NobleRyder

500ml

100.00

C0130

D-Hanks(HBSS)不含鈣鎂,含酚紅

NobleRyder

500ml

100.00

C0100

D-PBS(DPBS)

NobleRyder

500ml

80.00

C0120

Hanks(HBSS)含鈣鎂,不含酚紅

NobleRyder

500ml

100.00

C0110

Hanks(HBSS)含鈣鎂,含酚紅

NobleRyder

500ml

100.00

C0190

L-谷氨酰氨溶液(L-Glutamine,Liquid)(200mM)

NobleRyder

125ml

80.00

C0160

PBS緩沖液(液體)PH7.2-7.4

NobleRyder

500ml

80.00

C0200

丙酮酸鈉溶液(Sodium Pyruvate)100mM

NobleRyder

125ml

100.00

C0250

非必需氨基酸溶液(100×)

NobleRyder

125ml

140.00

C0240

青鏈霉素混合液(100×)

NobleRyder

125ml

80.00

C0050

NobleRyder

100ml

360.00

C0210

胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)不含酚紅

NobleRyder

125ml

90.00

P0220

胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)含酚紅

NobleRyder

125ml

90.00

C0230

胰蛋白酶消化液(0.25%)不含酚紅

NobleRyder

125ml

90.00

N0080

2×HEPES緩沖鹽溶液

NobleRyder

100ml

100.00

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