線粒體提取試劑盒 NobleRyder P0940;蘭州供應(yīng)線粒體提取試劑盒 NobleRyder
北京諾博萊德科技有限公司供應(yīng)線粒體提取試劑盒 NobleRyder P0940量大優(yōu)惠,咨詢 :
北京諾博萊德科技有限公司供應(yīng)線粒體提取試劑盒 NobleRyder P0940量大優(yōu)惠,咨詢 : 1215878164
線粒體提取試劑盒 | 50T | 320.00 |
線粒體提取試劑盒 | 100T | 580.00 |
線粒體提取試劑盒使用說(shuō)明
一,試劑盒組份
組份 | P0940 (50T) | P0940 (100T) |
Lysis Buffer | 50 mL | 100 mL |
Mito-Wash Buffer | 25 mL | 50 mL |
Store Buffer | 5 mL | 10 mL |
二,說(shuō)明
線粒體提取試劑盒用于從動(dòng)物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的線粒體。適合于動(dòng)物軟組織(肝或腦組織)和硬組織(肌肉)以及培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體的制備。其制備物產(chǎn)量高,可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。
三,操作步驟
1. 樣本處理
a. 組織勻漿:稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等,PBS或生理鹽水沖洗,洗凈血水,濾紙吸干,用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer,0℃冰浴上下研磨組織20次;
b. 培養(yǎng)細(xì)胞勻漿:消化細(xì)胞,PBS洗滌,800 × g 5~10 min離心收集細(xì)胞。計(jì)數(shù)。每次提取需要5 × 107個(gè)細(xì)胞,加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸細(xì)胞,將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi),0℃冰浴研磨30~40次;
2. 將組織或細(xì)胞勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管,4℃,1000× g 離心5 min;
3. 取上清,加入一新的離心管中,4℃,1000× g 再次離心5 min。
4.取上清,加入一新的離心管中,4℃, 12,000 × g 離心10 min。離心后的上清含胞漿成分,可從中提取胞漿蛋白。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管,線粒體沉淀在管底;
5. 在線粒體沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重懸線粒體沉淀,4℃,1000× g 離心5 min;
6.取上清,加入一新的離心管中,4℃, 12,000 × g 離心10 min。棄上清,高純度的線粒體沉淀在管底;
6. 用50 -100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸線粒體沉淀,立即使用或-70℃保存。
四 注意事項(xiàng):
1. 為保證獲得完整的線粒體,*是全程低溫操作。第二是快速。第三,在不破壞亞細(xì)胞器的情況下破碎細(xì)胞是制備線粒體的zui關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比,培養(yǎng)細(xì)胞特別是貼壁培養(yǎng)細(xì)胞在用玻璃勻漿器勻漿時(shí)較難破壁,因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴(yán)密的研杵上下研磨培養(yǎng)細(xì)胞。
2. 以離心力g計(jì)算正確的離心速度,不同的離心機(jī)可據(jù)此精確計(jì)算離心速度。
3. 進(jìn)行Western Blot和2D-膠電泳,可直接加入上樣緩沖液裂解線粒體。
五 儲(chǔ)存:四周內(nèi)使用可4℃儲(chǔ)存,長(zhǎng)期置-20℃
轉(zhuǎn)速與離心力換算
G=1.11×(10-5)×R×[rpm]2
G為離心力,一般以g(重力加速度)的倍數(shù)來(lái)表示;
[rpm] 2即:轉(zhuǎn)速的平方; R為半徑,單位為厘米。
北京諾博萊德科技有限公司位于北京市海淀區(qū),是一家專業(yè)從事生化試劑、分子生物學(xué)試劑、實(shí)驗(yàn)耗材及實(shí)驗(yàn)儀器研發(fā)、銷(xiāo)售、服務(wù)為一體的生物科技公司,公司主要經(jīng)營(yíng)的進(jìn)口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz, Fermantas(MBI), NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等;產(chǎn)品涉及化工原料、生化試劑、分子克隆相關(guān)試劑、細(xì)胞培養(yǎng)及檢測(cè)常用試劑、實(shí)驗(yàn)室常用耗材及儀器。
線粒體提取試劑盒 NobleRyder P0940
線粒體提取試劑盒 NobleRyder P0940