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去內(nèi)毒素質(zhì)粒大(小)量抽提試劑盒 NobleRyder D0904

  • 型   號(hào):
  • 價(jià)   格:
  • 更新時(shí)間:2024-08-28
  • 廠家性質(zhì):經(jīng)銷商

北京諾博萊德科技有限公司供應(yīng)去內(nèi)毒素質(zhì)粒大(小)量抽提試劑盒 NobleRyder D0904量大優(yōu)惠,咨詢 :

 去內(nèi)毒素質(zhì)粒大(小)量抽提試劑盒 NobleRyder D0904

北京諾博萊德科技有限公司供應(yīng)去內(nèi)毒素質(zhì)粒大(小)量抽提試劑盒 NobleRyder D0904量大優(yōu)惠,咨詢 :      1215878164

 

去內(nèi)毒素質(zhì)粒DAN提取試劑盒

 

試劑盒組成

50T

200T

保存溫度

RNaseA10mg/ml

400ul

2ml

-20

溶液

10ml

40ml

RT

溶液

10ml

40ml

RT

溶液

10ml

40ml

RT

內(nèi)毒素清除劑

25ml

100 ml

2-8

結(jié)合液

30 ml

120 ml

RT

玻璃奶

1ml

4ml

RT

TE緩沖液

10ml

30ml

RT

原理簡(jiǎn)介

本試劑盒在常規(guī)質(zhì)粒提取試劑盒的基礎(chǔ)上改進(jìn)而來(lái),增加內(nèi)毒素清步驟,提取的質(zhì)粒可用于一些要求更高的實(shí)驗(yàn),如轉(zhuǎn)染。
本試劑盒(以200T為例)可以用200小次或者*次提取。

北京諾博萊德科技有限公司位于北京市海淀區(qū),是一家專業(yè)從事生化試劑、分子生物學(xué)試劑、實(shí)驗(yàn)耗材及實(shí)驗(yàn)儀器研發(fā)、銷售、服務(wù)為一體的生物科技公司,公司主要經(jīng)營(yíng)的進(jìn)口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz, FermantasMBI, NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等;產(chǎn)品涉及化工原料、生化試劑、分子克隆相關(guān)試劑、細(xì)胞培養(yǎng)及檢測(cè)常用試劑、實(shí)驗(yàn)室常用耗材及儀器。

 

注意事項(xiàng)
1溶液低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀,可以37度水浴幾分鐘即可恢復(fù)澄清透明。用完請(qǐng)及時(shí)蓋緊蓋子。
2.
溶液Ⅰ中加入RNase 后請(qǐng)放2-8度保存,如果長(zhǎng)久不用(如一個(gè)月),可-20度凍存,或者按照比較分次加入。
3.可根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況中量或者大量提取,加入的試劑等比放大。
4內(nèi)毒素清除劑在常溫下出現(xiàn)面混濁現(xiàn)象,為正常,在2-8℃放置一段時(shí)間混濁會(huì)消失。
5.本試劑盒在去除內(nèi)毒素的過(guò)程中會(huì)損失少量質(zhì)粒,因而相對(duì)于常規(guī)提取,本試劑盒得率偏低。

操作步驟(以小量提取為例,中提或者大提可等比例加入)
溶液Ⅰ中加入RNaseA,混勻,28度保存。
1.取過(guò)液菌1-5毫升,5000g離心1分鐘收集細(xì)菌沉淀,棄上清(可重復(fù)多次收集于一管中,收集量可考慮菌液濃度與質(zhì)粒拷貝數(shù)),如為陽(yáng)性細(xì)菌,可加入100mg/ml的溶菌酶懸浮菌液,37度處理30分鐘,離心,收集沉淀。
2.在收集的菌液中,加入200ul溶液I,重懸細(xì)菌沉淀。確保沉淀*散開(kāi),無(wú)可見(jiàn)細(xì)菌團(tuán)塊(可vortex 5-10秒或更長(zhǎng)時(shí)間)。室溫放置2-3分鐘。
3.每管加入200ul溶液(如有沉淀,可37度水浴),輕輕顛倒離心管4-6次,使細(xì)菌*裂解,溶液透明。放置2-3分鐘,不過(guò)超過(guò)5分鐘。但也不要混勻后立刻加入溶液Ⅲ。
4.放置2-3分鐘后,每管加入200ul溶液III,隨即顛倒離心管4-6次混勻,可見(jiàn)白色絮狀物產(chǎn)生。
5zui高速(13,000rpm左右室溫離心5分鐘。
6.將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中,如有沉淀,可再次離心。
7.加入上清1/5體積冰預(yù)冷的內(nèi)毒素清除劑,振蕩混勻,溶液變渾濁,冰浴2min至溶液變清亮。
8
37水浴2min,不時(shí)振蕩,溶液又變渾濁。12000rpm室溫離心2min,溶液應(yīng)分為兩相,上層水相含質(zhì)粒DNA,下層油狀相含內(nèi)毒素。
9.將含質(zhì)粒DNA的上層水相轉(zhuǎn)移至新管,棄下層油狀相,注意不要吸入油狀相。重復(fù)抽提三次,即重復(fù)步驟7-9三次。
10.在得到的上清中加入等體積的結(jié)合液,再加入等體積的無(wú)水乙醇,混勻(上清:結(jié)合液:無(wú)水乙醇=1:1:1
11.玻璃奶搖勻。取20ul混勻的玻璃奶加入上面的混合液中,混勻。室溫放置5分鐘,期間顛倒2次。
12.10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘,倒掉上清;沉淀加入1ml 70%乙醇,振蕩混勻,10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘,去上清,70%乙醇重復(fù)洗一次,再用無(wú)水乙醇洗一次。去上清,再次離心2分鐘,用小吸頭吸去上清。
13.室溫放置10分鐘(如果為大提,請(qǐng)延長(zhǎng)放置時(shí)間到30分鐘,此步為去除殘余酒精,以免影響下游實(shí)驗(yàn)),加入3050ulTE緩沖液混勻溶解,55℃水浴5分鐘。離心,取上清轉(zhuǎn)移到一新的離心管中。此為所提質(zhì)粒。
14.電泳或者其他方法檢測(cè),進(jìn)入下游實(shí)驗(yàn)。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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