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真菌基因組DNA提取試劑盒(非柱式) NobleRyder D0928

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  • 更新時(shí)間:2024-08-28
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北京諾博萊德科技有限公司供應(yīng)真菌基因組DNA提取試劑盒(非柱式) NobleRyder D0928量大優(yōu)惠,咨詢 :

 

真菌基因組DNA提取試劑盒(非柱式) NobleRyder D0928

北京諾博萊德科技有限公司供應(yīng)真菌基因組DNA提取試劑盒(非柱式) NobleRyder D0928量大優(yōu)惠,咨詢 :      1215878164

真菌基因組DNA提取試劑盒

試劑盒組成

50T

200T

保存溫度

RNaseA10mg/ml

500ul

2ml

-20

蛋白酶K10mg/ml

500ul

2ml

-20

玻璃珠

5g

20g

RT

裂解液

15ml

60ml

RT

結(jié)合液

25ml

100ml

RT

玻璃奶

1ml

4ml

RT

TE緩沖液

10ml

30ml

RT

原理簡(jiǎn)介
真菌是具有真核和細(xì)胞壁的異養(yǎng)生物。種屬很多,已報(bào)道的屬達(dá)1萬(wàn)以上,種超過10萬(wàn)個(gè)。真菌通常又分為三類,即酵母菌、霉菌和蕈菌(大型真菌)。對(duì)于酵母菌和霉菌,可以用玻璃珠處理,而對(duì)于大型真菌,可直接用液液氮研磨。經(jīng)過前期處理的菌液,再經(jīng)過裂解液及蛋白酶處理后,玻璃奶吸附DNA,去掉其他雜質(zhì),,可得到高純度的基因組。提取純化后的DNA,可以直接用于 PCR/Real time-PCRsequencingSouthern blotmutant analysisSNP 等下游應(yīng)用實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng)
1由于真菌種類萬(wàn)千,對(duì)于一些特別難處理的真菌,可用液氮研磨,再用玻璃珠振蕩,蛋白酶K處理,一般都可以得到一定量的基因組DNA,如電泳檢測(cè)很弱,一般PCR都會(huì)有較好結(jié)果。
2
如果DNA提取量很少,可加長(zhǎng)玻璃珠處理時(shí)間,如果提取DNA片段很短,成彌散條帶,可減少玻璃珠處理時(shí)間。
操作步驟
1樣品的處理:
1)對(duì)于酵母菌,取1-2ml培養(yǎng)好的菌液,離心收集,棄上清。加入300ul 裂解液,加入10ul RNase A再加入100mg玻璃珠,在高速振蕩器上振蕩,約5-10min
2
霉素孢子也可相同處理:取50-100mg菌絲,加300ul裂解液,用玻璃研磨器適當(dāng)研磨分散菌絲,加入10ul RNase A再加入100mg玻璃珠,在高速振蕩器上振蕩,約30min
3
大型真菌(如蘑菇等):稱取50-100mg樣品,倒入適量的液氮,立即研磨重復(fù)3 次,使樣品研成粉末(如無(wú)液氮,可加300ul裂解液后用玻璃研磨器適當(dāng)研磨),加300ul裂解液,加入10ul RNase A再加入100mg玻璃珠,在高速振蕩器上振蕩,約5min
2
加入10ul 10mg/ml的蛋白酶K,充分混勻,55水浴消化,1530min。消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。
312000轉(zhuǎn)離心2min。將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管中。如有沉淀,可再次離心。
4在上清中加入三倍體積無(wú)水乙醇,充分混勻。
5
12000rpm離心5分鐘,去上清,核酸在沉淀中。
6.沉淀中加入500ul結(jié)合液,55℃水浴1-2分鐘,核酸沉淀可溶解。
6.玻璃奶搖勻。加入50ul搖勻的玻璃奶,混勻,室溫放置2分鐘,10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘,去上清;沉淀加入1ml 70%乙醇,振蕩混勻,10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘,去上清,70%乙醇重復(fù)洗一次,再用無(wú)水乙醇洗一次。去上清,再次離心2分鐘,用小吸頭吸去上清。
7
.室溫放置10分鐘(如果玻璃奶加量,請(qǐng)適當(dāng)延長(zhǎng)放置時(shí)間,此步為去除殘余酒精,以免影響下游實(shí)驗(yàn)),加入50100ul TE緩沖液混勻溶解,55℃水浴5分鐘。離心,取上清為所提基因組。
8
.電泳或者其他方法檢測(cè),進(jìn)入下游實(shí)驗(yàn)。

北京諾博萊德科技有限公司位于北京市海淀區(qū),是一家專業(yè)從事生化試劑、分子生物學(xué)試劑、實(shí)驗(yàn)耗材及實(shí)驗(yàn)儀器研發(fā)、銷售、服務(wù)為一體的生物科技公司,公司主要經(jīng)營(yíng)的進(jìn)口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz, FermantasMBI, NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等;產(chǎn)品涉及化工原料、生化試劑、分子克隆相關(guān)試劑、細(xì)胞培養(yǎng)及檢測(cè)常用試劑、實(shí)驗(yàn)室常用耗材及儀器。

真菌基因組DNA提取試劑盒(非柱式) NobleRyder D0928

 

 

 

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