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辣根過氧化物酶(HRP)標記套裝 NobleRyder P1100

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  • 價   格:
  • 更新時間:2024-08-28
  • 廠家性質:經銷商

北京諾博萊德科技有限公司供應辣根過氧化物酶(HRP)標記套裝 NobleRyder P1100量大優惠,咨詢 :

 

 

辣根過氧化物酶(HRP)標記套裝 NobleRyder P1100

 

北京諾博萊德科技有限公司供應辣根過氧化物酶(HRP)標記套裝 NobleRyder P1100量大優惠,咨詢 :      1215878164

 

辣根過氧化物酶(HRP)標記套裝

組成

規格

HRP(辣根過氧化物酶)

10mg

NaIO

500mg

NaBH

100mg

100mM乙酸鈉(PH4.4

5ml

0.2M PH9.5 CB

25ml

透析袋MD10(8000-14000)

20CM

透析袋MD25(8000-14000)

20CM

鐵夾(夾透析袋)

兩支

保存條件HRP(辣根過氧化物酶)-20度保存,透析袋28度處理。其他常溫保存。

產品說明:本套裝是將HRP標記的常用試劑集合為一體而成。本操作流程為經碘的高碘酸氧化法。適合于蛋白等含有氨基物質的標記。特別是抗體的標記。

如果待標記物分子量太小(如小于15KD),可能會穿過透析袋而造成樣品損失。

標記原理:在低PH下使RPNaIO4氧化后形成的醛基可蛋白等分子的氨基相連,形成斯夫氏鹼,后者可進一步用NaBH4還原生成穩定的酶標記物。

操作方法:

一,  標記量的計算:HRP(辣根過氧化物酶)分子量為40KD左右。一般為HRP:待標記物=2141之間。比如抗體IgG分子量一般為150160KD。則10mg HRP可標記抗體在10mg-20mg之間。

二,  計算好各步反應時間。作好開始標記的準備工作,是從下午開始。將HRP(辣根過氧化物酶)一共10mg加入1ml雙蒸水溶解。溶解后可放-20度存放一個月。如果想作兩次標記,可適當稱量5mg。但并不推薦稱量更小的質量。以免產生更大誤差。而且透析袋一般也只夠兩次用量。

三,  剪切合適長度透析袋,用雙蒸水清洗三次備用。透析袋分寬窄兩種,適合于不同量樣品的透析,請自己安排。稱取21.3mg NaIO4,加入0.5ml雙蒸水溶解現配現用,濃度為0.2M,將100mM乙酸鈉(PH4.4)用雙蒸水稀釋100倍成1mM乙酸鈉(PH4.4)。準備待標記物,如果待標記物本身鹽含量很低并且緩沖力差,如生理鹽水,可等二天再準備。如果不確定,將0.2M PH9.5 CB稀釋20倍(請不要一次稀釋完,留12ml左右備用),作為透析液,將待標記物裝入透析袋中4透析過液,透析袋適當留長約2ml體積的量以備第二天加入酶(透析袋使用請見附錄)。

四,  以一次標記完為例,如果標記量小,可按比例減小試劑的用量。取0.2ml現配的NaIO4溶液加入HRP溶液中,混勻,避光常溫反應兩小時。裝入透析袋中,在稀釋過的乙酸鈉(PH4.4)溶液中4透析過液(透析袋使用請見附錄)。

五,  第二天早上,如果樣品為固體,可用水溶解,加入1/20體積的0.2M PH9.5 CB,混勻。取出活化好的HRP裝入一適合離心管中,加入50ul  0.2M PH9.5 CB,混勻,立刻加入待標記物中,混勻。避光常溫反應兩小時。

六,  0.1ml新配的10mgml NaBH4液,混勻,常溫半小時。

七,  配制合適的透析液,如生理鹽水或者PBS等。透析酶標記物。

八,  如果有條件進一步純化,可透析半天后去進一步純化,如果不純化,請在4透析至少24小時。勤換液。

 

附透析袋使用方法:

本透析袋已預處理過,用雙蒸水清洗后將水用適當吸一下。就可直接使用。透析袋上下都可以用鐵夾,但如果鐵夾不夠用,下部可用細線或者其他的透析袋夾。

將透析袋輕輕的折上兩到三折。用線或者透析袋夾封住,上面支開,加入待透析物,留一定量的空氣在頂上,并小心的折一折,用鐵夾夾住,輕輕的擠壓,如沒發現有液體流出,可放入透析液中。一般透析可用純凈水瓶去頂使用。用一次性筷子或者其他合適物穿過鐵夾,將透析袋吊在透析液中,補充透析液,使透析液蓋過透析袋中的液面而不要淹過鐵夾下面。

 

 北京諾博萊德科技有限公司位于北京市海淀區,是一家專業從事生化試劑、分子生物學試劑、實驗耗材及實驗儀器研發、銷售、服務為一體的生物科技公司,公司主要經營的進口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz, FermantasMBI, NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等;產品涉及化工原料、生化試劑、分子克隆相關試劑、細胞培養及檢測常用試劑、實驗室常用耗材及儀器。

 

辣根過氧化物酶(HRP)標記套裝 NobleRyder P1100

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