明膠-瓊脂糖凝膠 4FF C20H25N3O 現貨
明膠-瓊脂糖凝膠 4FF C20H25N3O 現貨明膠-瓊脂糖凝膠 4FF 是采用溴化氰法將明膠耦合到瓊脂糖凝膠 4FF 基質上的一種親和層析填 料。明膠是一種高分子糖蛋白,在多種細胞的表面和許多細胞外液(包括血漿)中都發現了明膠的 存在,它可以特異性的結合纖維連接蛋白。明膠瓊脂糖凝膠 4FF 是專為純化或除去纖維連接蛋白的 一種親和層析填料。
明膠-瓊脂糖凝膠4FF:分離試劑,層析介質。
明膠-瓊脂糖凝膠 4FF 是采用溴化氰法將明膠耦合到瓊脂糖凝膠 4FF 基質上的一種親和層析填 料。明膠是一種高分子糖蛋白,在多種細胞的表面和許多細胞外液(包括血漿)中都發現了明膠的 存在,它可以特異性的結合纖維連接蛋白。明膠瓊脂糖凝膠 4FF 是專為純化或除去纖維連接蛋白的 一種親和層析填料。
1 技術指標
2 使用方法
2.1 準備凝膠
(1)讓凝膠和所有的試劑達到工作時的溫度。
(2)配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。
(3)明膠瓊脂糖凝膠 4FF 是保存在 20%的乙醇溶液中,取適量凝膠,清洗掉 20%的乙醇,抽 干。用緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1 的比例)配成勻漿。
2.2 裝柱
(1)將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜),務必使底端 無氣泡。
(2)用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內,注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口, 使凝膠在柱內自由沉降,連結好柱子頂端柱頭。
(3)打開蠕動泵,讓緩沖液用使用時流速的 1.33 倍的流速流過,使柱床穩定。用 2~3 倍柱體 積的緩沖液平衡柱子。
2.3 平衡 讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子,到流出液電導和 pH 不變。
2.4 上樣 (1)樣品用平衡液配制,常用磷酸鹽緩沖液或 Tris-HCl 緩沖液,渾濁的樣品要離心和過濾后 上樣。
(2)一般情況是讓目標產品結合在柱子上,用平衡液洗去雜質,再選擇一種洗脫液洗下目標 產品。
2.4 洗脫 明膠-瓊脂糖凝膠 4FF 可以采用不同的方式洗脫纖維連接蛋白:
(1)使用含有溴鹽的緩沖液,例如溴化鈉或溴化鉀,并在低于平衡緩沖液 pH 值的條件下洗脫。 一種推薦的洗脫緩沖液是:0.05 M 的醋酸鈉,pH 值 5.0,含 1.0 M 的溴化鈉或溴化鉀。
(2)可以在平衡緩沖液中加入 8 M 的脲,來洗脫吸附在凝膠上的纖維連接蛋白。
(3)纖維連接蛋白還可以通過在平衡緩沖液中添加精氨酸來進行洗脫。
2.6 再生 根據樣品的性質,明膠瓊脂糖凝膠 4FF 可以再生,以達到重復使用的目的。可以采用 2-3 柱體 積的高 pH 值(0.1 M 的 Tris - HCl,0.5 M NaCl,pH 值 8.5)的緩沖液和低 pH 值(0.1 M NaAC,0.5 M NaCl,pH 值 4.5)的緩沖液交替清洗凝膠。一個周期重復 3 次,然后用 3-5 倍柱體積的平衡緩沖 液平衡,即可進行下次試驗。如果在純化過程中使用了洗滌劑或變性劑(如 8 M 尿素),那么這些 洗滌劑也可以用于洗脫緩沖液中。 2.7 清洗 在一些應用中,像變性的蛋白質或脂類這樣的樣品,在再生過程沒有被洗脫下來,可以通過加 入一些洗滌劑,例如:0.1%的 Triton X-100 ,在 37°C 的條件下洗一會。立即用至少 5 倍柱體積的 結合緩沖重新平衡。 2.8 儲存 明膠-瓊脂糖凝膠 4FF 應儲存在 4-8℃,20%的乙醇溶液中。 特別注意: 上樣之前,樣品必須去除色素,否則色素會被吸附到填料上,影響填料的正常使用。