NobleRyder 支原體檢測試劑盒 即用型
NobleRyder 支原體檢測試劑盒 即用型NobleRyder 支原體檢測試劑盒 即用型試劑盒 VS0979
NobleRyder 支原體檢測試劑盒 即用型
本試劑盒是利用熒光染料(bisbenzimide,Hoechst 33258)檢測支原體污染。這種染料會(huì)結(jié)合到DNA的A-T富集區(qū)域,因?yàn)橹гw的DNA中A-T含量高(55%~80%),所以可將其染色而被檢測到。被支原體污染的細(xì)胞經(jīng)染色后在細(xì)胞周圍可看到許多大小均一的熒光小點(diǎn),即為支原體的DNA染色斑,說明有支原體污染。Hoechst 33258的最大激發(fā)波長為346nm,最大發(fā)射波長為460nm;Hoechst 33258和雙鏈DNA結(jié)合后,最大激發(fā)波長為352nm,最大發(fā)射波長為461nm。
操作步驟:
貼壁細(xì)胞:
1.被檢細(xì)胞接種于無菌的6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,接種密度為1-2×104。同時(shí),接種正常無支原體感染的同種細(xì)胞,作為陰性對照。
2.5天后,先吸去培養(yǎng)液,再加入1ml的固定液,靜置20min,
3.吸去固定液,晾干。
4.于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞),37℃避光放置15-20min或室溫靜置20~30min。
5.吸去Hoechst 33258工作液,加入2ml滅菌超純水洗滌三次,直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封片液,并以蓋玻片覆蓋。
6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā),觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀熒光小點(diǎn)。
懸浮細(xì)胞:
1.收集需檢測的細(xì)胞,1500rpm,5min。
2.將收集的細(xì)胞涂片于載玻片上,再加1ml的固定液,靜置20min。
3.吸去固定液,晾干。
4.于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞),37℃避光放置15~20min或室溫靜置20~30min。
5.吸去Hoechst 33258工作液,用無菌水洗滌玻片3次,直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封固液,并以蓋玻片覆蓋。
6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā),觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀熒光小點(diǎn)。
結(jié)果判斷(參考):
陰性:僅見細(xì)胞的細(xì)胞核呈現(xiàn)黃綠色熒光。
陽性:除細(xì)胞外,細(xì)胞周圍可見大量的大小均一的熒光著色顆粒。
注意事項(xiàng):
1.Hoechst工作液對人體有害,請注意防護(hù)。
2.固定液有刺激性氣味,建議在通風(fēng)櫥進(jìn)行固定。
3.支原體檢測時(shí),最好用不含抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)2~3代,這樣容易避免假陰性結(jié)果。
4.本試劑盒用于6孔板檢測時(shí),可以進(jìn)行50次檢測反應(yīng)。
5.檢測支原體污染,可以使用支原體高效Vero細(xì)胞,這樣可以提高檢測靈敏度,即將被檢測樣品接種于Vero細(xì)胞進(jìn)行檢測。
NobleRyder 支原體檢測試劑盒 即用型