NobleRyder還原型抗壞血酸維生素C含量
NobleRyder還原型抗壞血酸維生素C含量測試盒NobleRyder 還原型抗壞血酸(AsA)/維生素C含量測試盒(紫外分光光度法) 50管/48樣 AM0002
NobleRyder還原型抗壞血酸維生素C含量測試盒
測定意義:AsA又稱維生素C。AsA是輔酶、自由基清除劑、電子共體/受體和草酸鹽與酒石酸鹽生物合成的底物等。作為植物細胞中最重要的抗氧化劑,AsA在保護葉綠體免于氧化損傷起著舉足輕重的作用,也是衡量農(nóng)作物產(chǎn)品品質(zhì)的重要指標之一。
測定原理:抗壞血酸氧化酶(AAO)催化AsA氧化生成DHA,通過測定AsA的氧化速率,即可計算出AsA含量。
自備儀器和用品:研缽、冰、低溫離心機、紫外分光光度計/酶標儀、1 mL石英比色皿、可調(diào)式移液器和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣品中AsA提取:
按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑
一)進行冰浴勻漿,10000rpm 4℃離心20min,取上清液待測。
二、AsA測定操作:
1.分光光度計預熱30 min,調(diào)節(jié)波長到265 nm,蒸餾水調(diào)零。
2.試劑二在25℃水浴鍋中預熱30 min以上。
3.標準管:依次在比色皿中加入100μL標準液、800μL試劑二和100μL試劑三,迅速混勻,在265nm測定,記錄30s和150s的吸光值A1和A2,△A標準管= A1-A2。
4.測定管:依次在比色皿中加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑三,迅速混勻,在265nm測定,記錄30s和150s的吸光值A3和A4,△A測定管= A3-A4。
三、AsA含量計算:
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
(1)按蛋白濃度計算
AsA (μmol/mg prot) =[C標準液×(△A測定管÷△A標準管×V標準)÷(Cpr ×V樣)
=0.1 ×△A測定管÷△A標準管÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
AsA (μmol/g ) =[C標準液×(△A測定管÷△A標準管×V標準)÷(W ×V樣÷V樣總)
=0.1 ×△A測定管÷△A標準管÷W
C標準液:100μmol/L;V 標準:標準液體,0.1mL;V樣總:上清液總體積,1.0 mL=1 ×10-3 L;
V 樣:加入反應體系中上清液體積,0.1mL ;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量(g)。
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