NobleRyder West Femto ECL化學發光底物
NobleRyder West Femto ECL化學發光底物 NobleRyder ECL化學發光底物 即用型液體試劑 P9900-2*12.5mLNobleRyder ECL化學發光底物 即用型液體試劑 P9900-2*50mL
NobleRyder West Femto ECL化學發光底物
產品介紹:
WestFemto 最高靈敏度底物是用于辣根過氧化物酶(HRP)的增強型化學發光底物
本產品特點:
1、 靈敏—使用適當的一抗和二抗時,可在硝化纖維膜或 PVDF 膜上檢測豐度為飛克級的蛋白條帶
2、定量—所得信號的可定量檢測范圍跨越兩個數量級。 • 明亮信號—通過膠片或成像系統進行曝光,易于捕獲圖像。
3、長信號持續時間—優化條件下,可檢測的光信號輸出長達 8 小時。
4、穩定試劑—試劑盒組分能夠在 4°C 條件下穩定放置一年,在室溫下可穩定放置6 個月。
5、價格經濟—配方經過優化,可適用于濃度極低的抗體檢測。
6、1ng至0.2μg/mL 一抗(以1μg/mL 儲存液稀釋 1:5,000 至 1:100,000 倍)
7、 2ng至10ng/mL 二抗(以1μg/mL 儲存液稀釋 1:100,000 至 1:500,000 倍) 當 West Femto 底物與優化的抗體濃度和封閉緩沖液配合使用時,可檢測到常規 ECL 底物無法檢 測的低豐度靶標蛋白。
使用方法:
注:優化抗原和抗體的濃度。必須使用建議的抗體稀釋度,以保證陽性結果。有關建議的稀釋度范 圍請參考其他所需材料。
1) 將一抗濃度稀釋到 1ng 至 0.2μg/mL(以 1μg/mL 儲存液稀釋 1:5,000 至 1:100,000 倍) 2) 將二抗濃度稀釋到 2ng 至 10ng/mL(以 1μg/mL 儲存液稀釋 1:100,000 至 1:500,000 倍) 3) 將兩種底物組份按 1:1 比例混合,制備底物工作液。 注:暴漏于日光或任何其他強光可能損害工作液,為獲得最佳結果,將此工作液保存在琥珀色瓶中, 并避免長期暴漏于任何強光。短時間暴漏于實驗室常規照明不會損害該工作液。
4) 將印跡膜在 WestFemtoECL 底物工作液中孵育5分鐘。
5) 吸出多余試劑。用清潔的塑料膜蓋住該印跡膜。
6) 使印跡膜在 X 光膠片上曝光。
蛋白印跡法詳細操作步驟
1) 將印記膜從蛋白轉印設備中取出,加入合適的封閉液在溫室下孵育 20-60 分鐘,同時振蕩。以封閉膜上非特異性蛋白結合位點。 請注意:使用在前文建議的抗體稀釋度是非常重要的。
2) 將膜從封閉液中取出,與一抗工作液在溫室孵育 1 小時,同時振蕩;或在 28℃孵育過夜,不振蕩。
3) 將足量的洗滌緩沖液加至膜上,保證緩沖液將膜wan全覆蓋。振蕩孵育≥5 分鐘,更換洗滌緩沖液 并重復該步驟 4-6 次。增加洗滌緩沖液體積,洗滌次數和洗滌時間有助于降低背景信號。 注:孵育前,膜在洗滌緩沖液中的短暫淋洗會提高洗滌效率。 請注意:使用在前文建議的 HRP 標記二抗稀釋度是非常重要的。
4) 將 HRP 標記的二抗工作液與膜在溫室孵育1小時,同時振蕩。
5) 重復步驟3,以除去未結合的HRP 標記二抗。 注:膜與HRP標記二抗孵育后必須進行徹di洗滌。
6) 將A溶液與B液等比例混合,制備成工作液。每cm2膜使用 0.01~0.1ml 工作液。工作液可以 在溫室下穩定 8 小時。 注:暴漏雨日光或任何其他強光下可能損害工作液,為獲得嘴角結果,將此工作液保存在琥珀色瓶中,并避免長期暴漏雨任何強光。實驗室的常見照明不會損害工作液。
7) 將印記膜在工作液中孵育5分鐘。
8) 從工作液中取出印記膜,并置于一個塑料片或清潔的塑料紙(膜)中,用一張吸水紙吸除多余 的液體,并從印記和塑料紙之間小心地壓出氣泡。
9) 將包在塑料紙(膜)中的印記膜置于膠片暗盒中,蛋白質面朝上,除適用于膠片曝光的燈(如 紅色安全燈)之外,關閉所有的燈。
注意:膠片必須在曝光期間保持干燥,為獲得最佳效果,采取以下措施:
* 確保將多余的底物從膜和塑料紙上wan全去除。
* 在整個膠片處理期間,使用手套。
* 切莫將印記膜置于已顯影的膠片上,因為膠片上的化學物質會減弱信號。
10) 將X光膠片置于膜的上面。建議第一次曝光 60 秒。之后可調整曝光時間以達到最佳結果。化學發光反應在底物孵育后的前 5-30 分鐘期間是*強烈的。這一反應可以持續幾個小時,但強度會隨時間下降,如有底物孵育后較長時間后曝光,曝光時間可能需要延長以獲得較強信號。如果使用 磷光存儲成像設備(如Bio-Rad的分子成像儀系統)或CCD 照相機可能需要較長的曝光時間。
注意:膠片與膜之間的任何移動可能在膠片上造成人為的非特異信號。 11) 使用合適的顯影劑和定影劑對膠片進行顯影。如果信號太強,則縮短曝光時間或將印記膜進行 剝離并降低抗體濃度重新檢測。
重要提示:
1、為獲得最佳效果,必須優化該系統的全部組分,包括樣品量、一抗和二抗濃度以及膜和封閉試劑的類型。
2、使用該產品比使用沉淀比色 HRP 底物檢測所需的抗體濃度低。為優化抗體濃度,請進行一次 系統的點印跡分析。
3、沒有一種封閉試劑對所有系統而言都是最佳的,所以為每一個免疫印跡檢測系統找到最合適的 封閉緩沖液非常必需。封閉試劑有可能與抗體產生交叉反應,導致出現非特異性信號。封閉緩沖液 同時也會影響系統的靈敏性。當從一種底物轉換為另一種底物時,有時會出現信號衰減或背景增加 的現象,原因可能是封閉緩沖液不適合新的檢測系統。
4、使用親和素/生物su檢測系統時,避免使用牛奶作為封閉試劑,因為牛奶中含有不定量的內源性生物su,會導致高背景信號。
5、保證洗滌緩沖液、封閉緩沖液、抗體溶液和底物工作液的使用體積,以確保在整個實驗過程中 印跡膜wan全被液體覆蓋,避免膜變干。增大封閉緩沖液及洗滌緩沖液的使用量可以降低非特異性的 信號。
6、為獲得最佳效果,在孵育步驟請使用搖床。
7、 將 Tween20(終濃度 0.05-0.1%)加入封閉緩沖液和稀釋的抗體溶液,以降低非特異信號。使用高 品質的產品,如去污劑。它保存在安瓿中,過氧化物和其他雜質含量很低。
8、不要使用疊氮鈉作為緩沖液的防腐劑。疊氮鈉是 HRP 的抑制物。
9、避免手與膜直接接觸,實驗過程應戴手套或使用干凈的鑷子。
10、所有設備必須清潔且不沾染外來物質。金屬器械(如剪刀)不得具有可見的銹跡。銹跡可能導 致斑點形成和高背景。
11、底物工作液在室溫下可穩定8小時。日光或任何其他強光下可能損害底物,為獲得最佳結果,將底物工作液保存在琥珀色瓶中,并避免長期暴漏在任何強光下,短時間暴漏于實驗室常規照明不會損害該工作液。
NobleRyder West Femto ECL化學發光底物