NobleRyder AMPPD發光顯色試劑盒
NobleRyder AMPPD發光顯色試劑盒 即用型液體試劑 P9871-25T
AMPPD發光顯色試劑盒
產品簡介:
AMPPD是堿性磷酸酶的化學發光底物,在適宜的緩沖液中,隨著酶的催化水解作用,AMPPD分解成AMP-D,后者發出強度很高的光信號,其發光的速度取決于堿磷酶的濃度。當堿磷酶偶合到雜交的探針時,便可以通過此系統檢測到雜交分子的存在量。乙醇胺可使光信號輸出更理想。AMPPD為1,2-二氧環已烷衍生物,它是一種生物化學領域中最新的超靈敏的堿性磷酸酶底物,其特點:反應速度快,在很短時間內提供正確可靠的結果。在它的分子結構中有兩個重要部分,一個是聯接苯環和金剛烷的二氧四節環,它可以斷裂并發射光子;另一個是磷酸根基團,它維持著整個分子結構的穩定。在通常情況下,這種化合物很穩定。但是,結果有堿性磷酸酶存在,Dioxetane Phosphate作為酶的底物會在酶的催化一脫去磷酸根基團,形成一個不穩定的中間體。這個中間體隨即自行分解(二氧四節環斷裂),同時發射光子。Leagene AMPPD發光顯色試劑盒適用于PVDF膜,不推薦用于硝酸纖維素膜。
NobleRyder AMPPD發光顯色試劑盒
產品組成:
編號 名稱 | P9871 25T | P9871 50T | Storage | |
試劑(A): Dioxetane Buffer | A1: Dioxetane A | 50ml | 100ml | -20℃ |
A2: Dioxetane B | 50ml | 100ml | -20℃ | |
臨用時,取A1、A2等量混合,即為Dioxetane Buffer,不可預先配制。 | ||||
試劑(B): AMPPD | 2.5mg | 5mg | -20℃ 避光 |
自備材料:
1、轉印了蛋白并已以抗體-酶復合物檢測過的PVDF膜
2、Tris鹽緩沖液(TBS)
3、透明的塑料保鮮膜
4、蒸餾水
操作步驟(僅供參考):
1.臨用前,取適量的A1和A2,等量混合后獲得Dioxetane Buffer。
2.按2.5mgAMPPD溶于25ml Dioxetane Buffer, 配制0.1mg/ml AMPPD底物溶液即為AMPPD Dioxetane Buffer(發色發光顯跡液),用于膜的染色。
3.取適量Dioxetane Buffer洗膜兩次,每次15min。
4.對于PVDF膜進行的堿性磷酸酶反應, 膜置于新鮮配制的AMPPD Dioxetane Buffer 作用5min。
5.將膜移入適量的AMPPD Dioxetane Buffer中,浸泡5min(AP反應)。
6.取出PVDF膜,滴干水分,將膜正面朝下放在一張透明的塑料保鮮膜上,向后折疊將膜包裹起來,成為不漏水的封閉體。
7.在暗房中,將膜正面朝下放在感光膠片上,曝光數秒至數小時。
8.如需要,在室溫下以適量的TBS洗膜15min。
9.將膜放入AMPPD Dioxetane Buffer,條帶應在10~30min內出現。
10.用蒸餾水洗膜,終止反應。晾干后拍照留永jiu的記錄。
注意事項:
1、 PVDF膜置于膠片上后,不要改變位置。
2、 曝光時間應根據實驗情況,自行摸索。
3、 配制好的AMPPD Dioxetane Buffer,應避光低溫保存。
4、 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期: 12個月有效。
NobleRyder AMPPD發光顯色試劑盒