NobleRyder 蛋白銀染試劑盒
NobleRyder 蛋白銀染試劑盒 NobleRyder 即用型液體試劑 P2825-20T
蛋白銀染試劑盒
產(chǎn)品簡介:
蛋白銀染試劑盒(Protein Silver Stain Kit)是一種比較快速的可用于SDS-PAGE或非變性PAGE等蛋白銀染染色的試劑盒,該試劑盒含有增敏步驟,可明顯降低背景。其優(yōu)點(diǎn)還在于:1、操作簡單、快速;2、可用于2D凝膠的銀染,并可進(jìn)行后續(xù)的質(zhì)樸檢測(cè);3、目的條帶清晰;4、不含甲醇。Protein Silver Stain Kit與Protein Fast Silver Stain Kit相比,前者檢測(cè)靈敏度更高,尤其是在檢測(cè)小分子量蛋白質(zhì)的時(shí)候,但后者操作速度更快。本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
NobleRyder 蛋白銀染試劑盒
產(chǎn)品組成:
編號(hào) 名稱 | P2825 20T | Storage |
試劑(A): Silver Fixaton buffer(5×) | 100ml | RT 避光 |
試劑(B): Sil ilver Stain Sensitizer(5×) | 100ml | RT 避光 |
試劑(C): Silver Stain | 2×250ml | RT 避光 |
試劑(D): Silver Stain Enhancer(25×) | 2×10ml | RT 避光 |
試劑(E): Silver Stain Developer(5×) | 100ml | RT 避光 |
試劑(F): Silver Stain Stop Buffer(10×) | 100ml | RT |
使用說明書 | 1份 |
自備材料:
1.水平搖床或側(cè)擺搖床
2.去離子水(超純)、乙醇、冰乙酸
操作步驟(僅供參考):
1.準(zhǔn)備工作:以下操作以8.5×5.5cm、厚度為1.0mm的凝膠為例,以凝膠全部浸沒到溶液為準(zhǔn),一般用量是25~50ml,對(duì)于凝膠體積較大的,各溶液的使用量需按凝膠體積比例放大。整個(gè)銀染過程均應(yīng)在搖床上持續(xù)搖動(dòng)進(jìn)行,搖床轉(zhuǎn)速控制在60~70rpm。提前配制固定液,固定液A按無水乙醇:冰乙酸:去離子水=5:1:4的比例配制,固定液B按無水乙醇:冰乙酸:去離子水=1:1:18的比例配制。
2.水洗:電泳結(jié)束后,取凝膠放入去離子水中,搖床上清洗2次,每次5min。
3、固定:棄液,取凝膠放入50~100ml固定液A中,在搖床上室溫?fù)u動(dòng)1h;取凝膠放入50~100ml固定液B中,在搖床上室溫?fù)u動(dòng)2h至過夜;取凝膠放入50~100ml去離子水中,在搖床上室溫?fù)u動(dòng)5min;取凝膠放入25ml1×Silver Fixaton buffer中,在搖床上室溫?fù)u動(dòng)30min。(1×Silver Fixaton buffer,即取Silver Fixaton buffer (5×)5ml加入到20ml去離子水中,混勻,即1×Silver Fixaton buffer,一般應(yīng)24h內(nèi)用完。)
4、水洗:棄固定液,取凝膠放入50~100ml去離子水中清洗32次,每次10min。
6、增敏:棄液。配制銀染增敏工作液,即取Silver Stain Sensitizer 5×)5ml加入到20ml去離子水中,混勻,即1×Silver Stain Sensitizer,一般應(yīng)2h內(nèi)用完。室溫下用1×Silver Stain Sensitizer孵育凝膠2次,每次30min。立即用去離子水清洗凝膠4次,每次15min。
7、銀染:配制銀染工作液,即取1ml Silver Stain Enhancerl加入到24m Silver Stain中,混勻,即得銀染工作液,一般應(yīng)2h內(nèi)用完。取凝膠入銀染工作液,在搖床上室溫?fù)u動(dòng)30min。
8、水洗:棄液,在搖床上用去離子水清洗凝膠4次,每次4min。
9、顯影:配制銀染顯影工作液,即取Silver Stain Developer(5×)5ml加入到20ml去離子水中,混勻,即1×Silver Stain Developer,一般應(yīng)30min內(nèi)用完。清洗凝膠后,立即置于1×Silver Stain Developer中,室溫孵育5~10min,直至蛋白條帶清晰可見。一般顯色30s后就會(huì)出現(xiàn)棕色沉淀,繼續(xù)顯影2~3min,亦可延長至5min以上,如果顯影效果不佳,可重新更換1×Silver Stain Developer繼續(xù)顯影。
注意事項(xiàng):
1、背景過深:①顯色時(shí)間過長;②洗滌不充分;③凝膠中殘留物質(zhì)未去除干凈;④去離子水的純度過低。
2、蛋白條帶較淺:①蛋白的半guang氨酸含量過低;②銀染后水洗時(shí)間過長;③蛋白量較低;④固定后的洗滌時(shí)間不夠,導(dǎo)致乙酸殘留。
3、凝膠上出現(xiàn)雜質(zhì)或非蛋白的印跡:①凝膠沒有被充分浸沒,應(yīng)加入足量溶液;②容器沒有清洗干凈;③凝膠接觸金屬物質(zhì);④指紋或其他壓跡。
4、本染色液呈酸性,有輕微腐蝕性,使用時(shí)請(qǐng)作必要防護(hù)。
有效期: 3個(gè)月有效。
NobleRyder 蛋白銀染試劑盒